1. 預期用途
本試劑盒用于檢測血清、血漿中的百日咳黏附素（PRN）IgG抗體，僅供研究使用，不得用于診斷。
2. 檢測原理
試劑盒采用間接法原理：將百日咳黏附素（PRN）抗原包被于酶標板上，加入樣品，樣品中的IgG抗體被捕獲，結合形成“抗原-IgG抗體”免疫復合物，清洗去除游離的雜質，再加入HRP標記的酶標二抗，形成“抗原-IgG抗體-酶標二抗”夾心復合物，清洗去除多余的酶標抗原，加入TMB顯色，再加入終止液，用酶標儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測抗體的濃度呈正比。
3. 包含的實驗材料實驗材料
| 名 稱 Label | 組成成分 Kit Components | 數量（48T） Quantity | 數量（96T） Quantity |
| 酶標板 | 包被板 | 8×6條 | 8×12條 |
| 陽性對照 | 陽性對照 | 1支×0.5mL | 1支×1mL |
| 陰性對照 | 陰性對照 | 1支×0.5mL | 1支×1mL |
| 酶標二抗 | HRP酶標記抗人IgG | 1支×5mL | 1支×10mL |
| 樣品稀釋液 | PBS、BSA等 | 1支×5mL | 1支×10mL |
| 濃縮洗液（20×） | 20倍濃縮洗液 | 1支×15mL | 1支×25mL |
| 顯色劑 | 過氧化氫、TMB | 1支×6mL | 1支×10mL |
| 終止液 | 稀硫酸、抗沉淀劑 | 1支×3mL | 1支×6mL |
如需單獨采購通用型組分，請提供對應的組分名稱。
4. 需要但未包含的實驗材料
· 蒸餾水或去離子水，一次性離心管、一次性手套等耗材；
· 移液器、多通道移液器及配套槍頭；
· 燒杯、量筒、試劑瓶等容器具；
· 用于封貼微孔板的封板膜或其他替代材料；
· 微孔板振蕩器（如有需要）、離心機、旋渦振蕩器等輔助設備；
· 恒溫培養箱、恒溫水浴箱、酶標儀、洗板機。
5. 試劑的準備及儲存
· 試劑盒各組分應儲存于2~8℃保存；
· 使用前請確保試劑盒按規定的條件儲存，每次實驗僅準備所需實驗用量的試劑；
· 1×洗液的配制：濃縮洗液（20×）如有晶體析出，需在37℃下加熱至晶體全部溶解后使用。用蒸餾水1:20稀釋，例如：10mL濃縮洗滌液加入190mL的蒸餾水，混合均勻。配制好的洗液可以在室溫保存1周；
6. 樣品采集、預處理及儲存
下面列出的樣品收集和儲存條件旨在作為一般性指導，不同類型樣品的儲存、使用穩定性尚未完全評估。
· 血清：使用血清采集管采集全血，室溫靜置待血細胞凝集后取的血清，或直接在1000×g下離心15分鐘取得血清。操作應柔和，避免溶血發生。獲取的血清應及時進行檢測，如不能及時進行檢測，應等分為多份，儲存在-20℃及以下溫度條件，儲存時間不超過6個月，冷凍儲存血清樣品凍融不超過2次。
· 血漿：使用EDTA或肝素采血管收集血漿。全血采集后以1000×g離心15分鐘取得血漿。操作應柔和，避免溶血發生。獲取的血漿應及時進行檢測，如不能及時進行檢測，應等分為多份，儲存在-20℃及以下溫度條件，儲存時間不超過6個月，冷凍儲存血漿樣品凍融不超過2次。
· 不能檢測含疊氮鈉、懸浮纖維蛋白或聚集物、重度溶血樣品。
· 樣品應無微生物污染。
7. 實驗步驟
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右，也可置于37℃溫箱快速回溫至室溫。
注意：酶標板未恢復室溫前，請勿開封。
| 1 | 合理安排陽性對照孔、陰性對照孔、空白孔、樣品孔。 |
| 2 | 陽性對照孔加入陽性對照100uL，陰性對照孔加入陰性對照100uL。陰陽對照各設置3孔。 |
| 3 | 樣本孔先加入樣品稀釋液80uL，再加入樣本20uL。 空白孔不加樣品不加酶，其余操作與樣品孔相同。 |
| 4 | 蓋上封板膜，在37℃下孵育30分鐘。 |
| 5 | 洗板5次，最后一次洗板后棄去殘留洗液，倒扣酶標板，在干凈的吸水紙上拍干。 |
| 6 | 每孔加入預先配制好的酶標抗體工作液100μL。 |
| 7 | 蓋上封板膜，在37℃下孵育30分鐘。 |
| 8 | 洗板5次，最后一次洗板后棄去殘留洗液，倒扣酶標板，在干凈的吸水紙上拍干。 |
| 9 | 每孔加入顯色劑100uL |
| 10 | 37℃下避光孵育15**分鐘。 |
| 11 | 每孔加入終止液50μL。 |
| 12 | 使用酶標儀在450nm檢測波長及620~690nm參比波長條件下測定吸光度值，如果沒有參比波長則僅選擇450nm波長進行檢測。如果最高濃度校準品OD值過高，應立即在405/630nm雙波長條件下檢測。 |
8. 陽性判斷值Cut-Off
Cut-Off =陰性對照孔平均OD值×2.1（陰性對照孔OD均值小于0.050時，按0.050計算）。
例：陰性對照孔平均OD值為0.100，則Cut-OFF值=0.100×2.1=0.210；
陰性對照孔平均OD值為0.020，則Cut-OFF值=0.050×2.1=0.105。
9. 結果判斷
陽性結果：樣本OD值＞Cut-OFF值，結果判為陽性；
陰性結果：樣本OD值≤Cut-OFF值，結果判為陰性；
10. 檢測的局限性
樣本濃度低于檢出限時，檢測結果無法進行準確判斷。本試劑為定性試劑，不能作為定量試劑使用。
11. 產品性能指標
以下結果基于校準品的濃度值實驗得出，未納入基質效應等其他因素的潛在影響。
檢測3份企業陽性參考品，結果均為陽性。檢測3份企業陰性參考品，結果均為陰性。
精密度：板內精密度CV＜10%（N=20），板間精密度CV＜15%（N=20）。
特異性（Analytical specificity）：其他相關因子在稀釋緩沖液中制備為10μg/mL測定，沒有觀察到明顯的交叉反應。
