注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定，確保蛋白濃度在20-2000μg/ml內(nèi)。
貨號：RJ-W-C202
規(guī)格：100T/96S 產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑A：液體 20ml×1瓶，4℃保存。試劑B：液體 1ml×1支，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品0.5mg/mL：液體1ml×1支，-20℃保存。
產(chǎn)品說明：
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。測定原理： 堿性條件下，蛋白質(zhì)中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵，能將Cu2+還原成Cu+；2分子的BCA與Cu+結(jié)合，生成紫色絡(luò)合物，在540-595nm有吸收峰，562nm處吸收峰最強。
自備儀器和用品：
臺式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。
工作液配制：臨用前請根據(jù)擬用工作液體積（樣本數(shù)×0.2mL），將試劑A和B按照50：1的比例混合，蓋緊后充分混勻。
操作步驟：
一、樣品中可溶性蛋白質(zhì)提�。�
1. 液體樣品：澄清液體樣品可以直接測定。
2. 組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水），冰浴勻漿， 10000rpm，4℃離心10min，取上清，即待測液。（動物樣品常常需要稀釋）
3. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000rpm，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
二、測定操作：
1. 可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到562 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 工作液置于60℃水浴預(yù)熱30 min。
|
| 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測定管 |
| 蒸餾水（μL） | 4 |
|
|
| 標(biāo)準(zhǔn)品（μL） |
| 4 |
|
| 待測液（μL） |
|
| 4 |
| 工作液（μL） | 200 | 200 | 200 |
混勻后置于60℃保溫30min，于微量玻璃比色皿/96孔板，于562nm處測定吸光值A，分別記為A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A測定管。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。三、計算公式：
Cpr (mg/mL)= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測定管－A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）
=0.5×（A測定管－A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）
注意事項：
1. BCA 法蛋白含量測定試劑盒，適用于測定蛋白濃度在20-2000μg/ml 樣品。測定前取1-2 個樣做預(yù)實驗，樣品蛋白含量太高的話，請稀釋至相應(yīng)濃度范圍內(nèi)，以確保測定的準(zhǔn)確性。
2. 待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、蒸餾水或PBS 提取。
由于受測定溫度及時間等的影響，請嚴(yán)格按照給定條件測定。
(pdf)
